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  • 生物信息学基础知识【03】二代测序原理

    二代测序原理:

    1、DNA待测文库构建。 超声波把DNA打断成小片段,一般200--500bp,两端加上不同的接头
    2、Flowcell。一个flowcell,8个channel,很多接头
    3、桥式PCR扩增。每个DNA片段将在各自位置集中成束,每一束含有单个DNA模板的很多拷贝,目的:将碱基的信号强度放大,达到测序所需的信号要求。
    4、测序。边合成边测序。反应所需材料,dNTP的3’端特殊处理,不能继续反应,因此每次只能添加一个碱基,另外每个碱基有一种颜色。dNTP添加到链上后,所有未使用游离dNTP和DNA聚合酶会被洗脱掉。接着,再加入激发荧光所需的缓冲液,用激光激发荧光信号,并有光学设备完成荧光信号的记录,最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后,再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP 3’-OH保护基团,以便能进行下一轮的测序反应。

    双端测序:正义链测100,反义链测100,合起来200,这样测序结果比较准确。

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  • 原文地址:https://www.cnblogs.com/chenpeng1024/p/9177669.html
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