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  • Insulator|enhancer|LCR|EKLF|CTCF|调控基因印记| A-USF|HATs|ChIP|Chip-seq|PAGE|

    表观遗传学

    转录因子

    基本转录因子:TFIIDABFEHPol II

    基转录因子具有稳定作用

    组织特异性转录因子:GATAEKLFBcl11A

    特异性是在特定组织中的细胞中时与细胞发育有关,组织特异性可用于制药

    其它:FOGCTCFUSFActin

    TATA boxATATA

    应用:诊断罕见病;转录结构作为克隆载体的信息,以前仅考虑1kb内的结构,因为发现成环(3C实验),所以现在也考虑远端原件,共同组成新的转录单元,比如promoterenhancer之间的相互作用,promoter与下游promoter之间的关系。Insulator起到隔离上游enhancer作用和绝缘旁边promoter作用。LCR于作用下游enhancer。必须满足基本组分都存在,而且能够相互作用,才能成环。

    细胞不同发育时期的基因开启或关闭,蛋白质复合物可在上游调控这些基因开启或关闭。EgEKLF打掉红细胞就不能运输氧气。

     

     

    CTCF组织染色体结构的作用,可以使得性染色体失活,作为检测疾病的指标。在转录过程中的情况:

    调控基因印记,父源gene甲基化不能表达,母源geneCTCFimpromoter)没甲基化能表达:

     

     A-USF在胚胎发育中的作用结果:

     

     机制是

    HATs组蛋白乙酰化阻断酶或者它组成复合物,改变下游gene开放程度。

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    研究转录因子与DNA结合的实验技术

    In vitro:电泳迁移率变动分析 (EMSA)

           DNA Foot-printing

    In vivo:染色质免疫沉淀 (ChIP)

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    染色质免疫沉淀技术 (ChIP)

    Chip-seq实验:可以看转录因子,自己也可以看转录因子间相互作用。

    研究对象:组蛋白

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    组蛋白甲基化

    PAGE是一种----定性方法

    EgH3组蛋白和Ac-H4修饰

     

    质谱是一种定量方法

    ChIp-PCR是一种定量方法

    ChIp-CHIP芯片

    CHIP-seq workflow

    资料:Snyder M Group. Genome Res. 22:1813-1831 (2012)

    文中阐述CHIP-seq的步骤、如何判别好坏抗体、怎么数据分析(eg:确定是一个峰)

    现在已有专门软件。

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