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  • featureCounts 安装和使用

    官网:http://subread.sourceforge.net/

    Subread package: high-performance read alignment, quantification and mutation discovery

    The Subread package comprises a suite of software programs for processing next-gen sequencing read data including:

    • Subread: a general-purpose read aligner which can align both genomic DNA-seq and RNA-seq reads. It can also be used to discover genomic mutations including short indels and structural variants.
    • Subjunc: a read aligner developed for aligning RNA-seq reads and for the detection of exon-exon junctions. Gene fusion events can be detected as well.
    • featureCounts: a software program developed for counting reads to genomic features such as genes, exons, promoters and genomic bins.
    • Sublong: a long-read aligner that is designed based on seed-and-vote.
    • exactSNP: a SNP caller that discovers SNPs by testing signals against local background noises.

    These programs were also implemented in Bioconductor R package Rsubread.

    下载安装: 

    https://sourceforge.net/projects/subread/files/

    解压完成即可使用,可执行程序在bin目录

    wget https://jaist.dl.sourceforge.net/project/subread/subread-2.0.2/subread-2.0.2-Linux-x86_64.tar.gz

    tar -zxvf subread-2.0.2-Linux-x86_64.tar.gz

    cd subread-2.0.2-Linux-x86_64

    cd bin

    ls

    五、软件使用: 

    基本表达式

    featureCounts [options] <input.file>

    参数说明

    参数说明
    input file 输入的bam/sam文件,支持多个文件输入
    -a < string > 参考gtf文件名,支持Gzipped文件格式
    -F 参考文件的格式,一般为GTF/SAF,C语言版本默认的格式为GTF格式
    -A 提供一个逗号分割为两列的文件,一列为gtf中的染色体名,另一列为read中对应的染色体名,用于将gtf和read中的名称进行统一匹配,注意该文件提交时不需要列名
    -J 对可变剪切进行计数
    -G < string > 当-J设置的时候,通过-G提供一个比对的时候使用的参考基因组文件,辅助寻找可变剪切
    -M 如果设置-M,多重map的read将会被统计到
    -o < string > 输出文件的名字,输出文件的内容为read 的统计数目
    -O 允许多重比对,即当一个read比对到多个feature或多个metafeature的时候,这条read会被统计多次
    -T 线程数目,1~32
    下面是有关featrue/metafeature选择的参数 参数说明
    -p 只能用在paired-end的情况中,会统计fragment而不统计read
    -B 在-p选择的条件下,只有两端read都比对上的fragment才会被统计
    -C 如果-C被设置,那融合的fragment(比对到不同染色体上的fragment)就不会被计数,这个只有在-p被设置的条件下使用
    -d < int > 最短的fragment,默认是50
    -D < int > 最长的fragmen,默认是600
    -f 如果-f被设置,那将会统计feature层面的数据,如exon-level,否则会统计meta-feature层面的数据,如gene-levels
    -g < string > 当参考的gtf提供的时候,我们需要提供一个id identifier 来将feature水平的统计汇总为meta-feature水平的统计,默认为gene_id,注意!选择gtf中提供的id identifier!!!
    -t < string > 设置feature-type,-t指定的必须是gtf中有的feature,同时read只有落到这些feature上才会被统计到,默认是“exon”
     
    使用示例:

    $ /home/software/subread-2.0.2-Linux-x86_64/bin/featureCounts -T 5 -t exon -g gene_id -a /path-to-gtf/ERCC.gtf -o /path-to-output/all.id.txt *.bam 1>counts.id.log 2>&1



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