| 基因组所三代单分子测序PacBio完成技术升级—超长读长助力基因组学研究 |
| 2015-09-23 | 作者：所级中心基因组平台 张兵 【关闭】 |
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近日，基因组所所级中心基因组平台三代单分子实时测序PacBio完成技术升级优化，实现了数据产量和读长的双重提升，一个SMRT Cell芯片可产出高达1Gb数据， reads平均长度达到14kb，N50超过19kb，为基因组学相关研究提供了有力支撑。
PacBio 测序read和subread长度分布 利用三代单分子实时测序仪PacBio系统，平台提供的技术支撑服务包括： 1.基因组de novo测序组装 PacBio测序read超长的特点，适合于基因组de novo组装。例如一个5Mb大小的细菌基因组，只需一个SMRT Cell测序即可完成基因组finish，周期小于5天。对于复杂基因组,预期Contig N50超过100kb，推荐de novo组装需50ⅹ以上的PacBio测序覆盖，二代测序数据和PacBio测序数据混合组装，推荐30ⅹ以上的PacBio测序覆盖，如用于基因组scaffold构建，推荐10ⅹ以上的PacBio测序覆盖。 2.全长转录本测序 受传统测序技术短读长的限制，较难获得全长转录本序列。在PacBio测序平台上，我们开发了全长cDNA测序和分析技术流程。PacBio测序产生的read长度远大于绝大部分cDNA长度，因此无需经过后续序列拼接组装，即可获得准确全长cDNA序列，分析基因转录后可变剪切信息以及LncRNA表达等。 3.碱基修饰检测 PacBio测序另一个优势是可获得DNA聚合酶促反应的分子动力学数据，分析碱基修饰信息。因为碱基基团修饰后的位阻作用，DNA聚合酶在带有修饰碱基的核苷酸位置前后，表现出延滞效应，经计算分析得到IPD ratio差异,不同修饰的IPD ratio值不同，从而获取碱基修饰信息。目前测序比较准确的修饰类型是m6A,另外5mC、5hmC、4mC等修饰信息也可得到，但需要特殊的样品处理或数据处理。 此外，基于PacBio系统，平台还提供基因组BAC克隆混合测序、长扩增子测序、极端GC含量DNA测序等技术开发服务。 |
